La coloration de Gram, également connue sous le nom de méthode de Gram, est une technique de coloration des bactéries dans un échantillon microscopique afin de les différencier en deux grandes catégories : les bactéries à Gram positif et les bactéries à Gram négatif.
La coloration de Gram est basée sur la réaction différentielle des parois cellulaires des bactéries vis-à-vis d'un ensemble de colorants. La principale différence entre les bactéries à Gram positif et les bactéries à Gram négatif réside dans la composition et la structure de leurs parois cellulaires.
Le processus de coloration de Gram comprend plusieurs étapes. Tout d'abord, l'échantillon bactérien est fixé sur une lame de verre. Ensuite, la coloration se déroule en suivant les étapes suivantes :
Coloration au cristal violet : la lame est immergée dans une solution de cristal violet, un colorant violet foncé qui pénètre dans toutes les bactéries présentes sur la lame.
Fixation au lugol : le cristal violet est fixé dans les bactéries à l'aide d'une solution d'iode, appelée lugol. L'iode forme un complexe insoluble avec le cristal violet à l'intérieur des bactéries.
Décoloration à l'alcool ou à l'acétone : après fixation à l'iode, le surplus de colorant est enlevé en rinçant la lame avec de l'alcool ou de l'acétone. Cette étape est cruciale car elle permet de différencier les bactéries à Gram positif des bactéries à Gram négatif.
Coloration de contraste au safranine : pour renforcer la coloration, la lame est immergée dans une solution de safranine, un colorant rouge. Les bactéries à Gram négatif prennent une teinte rose-rouge tandis que les bactéries à Gram positif restent violettes.
En observant le résultat au microscope, les bactéries à Gram positif apparaissent violettes, en raison de leur capacité à retenir le cristal violet, tandis que les bactéries à Gram négatif apparaissent rose-rouge, à cause de l'absence de rétention du cristal violet et de la fixation de la safranine.
La coloration de Gram est une méthode couramment utilisée en microbiologie pour préliminairement identifier et classer les bactéries en deux groupes distincts. Cette classification est importante car les bactéries à Gram positif et à Gram négatif présentent des différences dans leur structure et leur réactivité aux antibiotiques, ce qui influence la sélection d'un traitement approprié en cas d'infection bactérienne.
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